引 言
液相色谱的检测器包括选择型检测器和通用型检测器,选择型检测器包括紫外可变波长检测器(VWD),光电二极管阵列检测器(DAD)和荧光检测器(FLD)等;通用型检测器包括示差折光检测器(RID),蒸发光散射检测器(ELSD)和电雾式检测器(CAD)。示差检测器属于浓度型通用检测器,CAD 属于质量型通用检测器。CAD 的灵敏度高,可以运行梯度方法,非常适合灵敏度要求高的复杂成分分析。示差折光检测器是经典的通用型检测器,只要被测组分与洗脱液的折光率有差别就可使用,但是只能运行等度方法。液相色谱分析里,针对没有紫外吸收的糖类化合物的定量分析和大分子聚合物的分子量分析,一般常用示差检测器。目前有大量的检测标准使用示差检测器,涵盖了制药、食品和化工等多个领域。
图1:示差检测器原理图
Thermo Scientific™ Vanquish™ 示差折光检测器(RID)是赛默飞推出的新一代示差通用检测器。Vanquish RID 可以轻松集成到 Vanquish HPLC 和 UHPLC 系统中,节省工作台的空间并简化仪器的整体处理过程。该检测器与 Thermo Scientific™ Chromeleon™ 色谱数据系统(CDS)软件完全集成,可以以高 50Hz 的数据采集速率进行实验,实现的重现性和样品通量,从而为常规实验室提供的体验。
Vanquish 新一代示差检测器亮点
低基线漂移和噪声,保证基线足够稳定
恒温光学工作台和流通池主动加热,实现高可重复性
高流速范围和宽线性范围,确保与多种应用兼容
智能启动功能,自动执行 Purge、平衡、自动调零以及基线稳定性和噪声控制功能
与反相和正相溶剂完全相容
Vanquish HPLC 和 UHPLC 系统与 Vanquish RID 通过深度优化的流路连接,结合 Thermo Scientific™ Chromeleon™ 色谱数据系统 (CDS) 软件实现单点智能控制,从而提供高度集成的解决方案
案例分享 1
本案例采用 Vanquish Flex UHPLC 系统搭配 Vanquish 新一代示差折光检测器,快速分析了乳制品中的牛甲状腺球蛋白、牛丙种球蛋白、鸡卵清蛋白和马肌红蛋白以及实际样品,可以为乳制品行业中蛋白质材料的质量控制提供一种经济高效的解决方案。
图 2 中 A 为使用 HPLC SEC 色谱柱(300 × 7.8 mm,3 µm)的色谱图,B 为使用 UHPLC SEC 色谱柱(300 × 4.6 mm,1.9 µm)的色谱图。使用亚 2 微米的超高效体积排阻色谱柱后,分析时间从 20 分钟缩短为 10 分钟,同时四种蛋白的峰形和分离度更好。支持高数据采集速率的 Vanquish 新一代示差检测器和亚 2 微米超高效体积排阻色谱柱结合,可以实现快速分析,为质量控制实验室提供显著的优势,有助于其实现产品表征的高通量筛选方法。
图2:使用 HPLC SEC 色谱柱 (A) 和 UHPLC SEC 色谱柱 (B) 时蛋白质混合物标准品的 RID 色谱图,牛甲状腺球蛋白 (1)、牛丙种球蛋白 (2)、鸡卵清蛋白 (3) 和马肌红蛋白 (4)
案例分享 2
根据 2020 版药典四部药用辅料中乳糖的测定方法,使用 Vanquish Core 液相搭配 Vanquish 新一代示差检测器,采用赛默飞 Hypersil APS-2(4.6×250mm,5μm)色谱柱进行分析。结果表明乳糖和蔗糖的响应和分离度良好。新标准中要求柱温和检测器温度均为 30℃,赛默飞新一代示差采用恒温光学工作台和流通池主动加热技术,可以很好的保证基线稳定和重复性。
图3 :乳糖和蔗糖对照品溶液叠加色谱图
结 论
Vanquish 新一代示差检测器可以轻松集成到 Vanquish HPLC 和 UHPLC 系统中,节省工作台的空间并简化仪器的整体处理过程。该检测器与 Chromeleon™ 色谱数据系统软件完全集成,可以以高数据采集速率进行实验,结合亚 2 微米的超高效色谱柱,可以实现快速分析,为用户提供了一种高通量的质量表征利器。